小鼠Toll样受体3(TLR3)ELISA试剂盒实验说明书

　　货号：BS-9374

　　名称：小鼠Toll样受体3(TLR3)ELISA试剂盒

　　规格：96T/48T

　　目前主流品牌的小鼠TLR3 ELISA试剂盒说明书框架和核心操作基本统一，以下是整理后的通用标准实验说明书，适配大多数科研用试剂盒：

　　小鼠Toll样受体3(TLR3)ELISA试剂盒使用说明书

　　一、试剂盒原理

　　本试剂盒采用?双抗体夹心法?检测小鼠样本中TLR3的含量：

　　预包被板上已包被小鼠TLR3特异性抗体，加入样本/标准品后，目标TLR3会与包被抗体结合;再加入生物素标记的检测抗体，形成"抗体-抗原-生物素化抗体"复合物;随后结合HRP标记的链霉亲和素，催化底物TMB显色，颜色深浅与样本中TLR3浓度呈正相关，通过酶标仪检测吸光度(OD值)即可计算样本浓度。

　　二、试剂盒组分(96T规格)

　　三、适用样本类型

　　可检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆、细胞裂解液等样本;脑脊液、尿液等特殊样本需提前验证适配性。

　　四、实验前准备

　　试剂配制?：

　　洗涤液：20×浓缩洗涤液用去离子水按1:19稀释，室温存放备用

　　标准品：标准品离心后加入样本稀释液溶解，定容至浓度1000pg/mL，室温静置10min后梯度倍比稀释，得到1000、500、250、125、62.5、31.25、15.62、0pg/mL共8个浓度梯度

　　样本预处理?：

　　血清/血浆：离心取上清，4℃保存不超过24h，长期分装-20℃冻存，避免反复冻融

　　组织匀浆：按1:9(质量/体积)比例加入预冷PBS，研磨破碎后离心取上清，同上保存

　　提前将所有试剂平衡至室温(20-25℃)，避免温度差影响反应。

　　五、标准操作步骤

　　加样?：分别设置标准品孔、样本孔、空白孔，空白孔加100μL样本稀释液，标准品/样本孔每孔加100μL，轻轻晃动混匀，封板后37℃孵育1h

　　洗板?：弃去液体，每孔加200μL洗涤液，静置30s后弃去，重复洗板5次，拍干微孔板

　　加检测抗体?：每孔加入100μL生物素标记检测抗体，封板后37℃孵育1h

　　洗板?：重复步骤2，洗板5次拍干

　　加酶结合物?：每孔加入100μL HRP-链霉亲和素，封板后37℃避光孵育30min

　　洗板?：重复步骤2，洗板5次拍干

　　显色?：每孔加入100μL TMB底物，37℃避光显色15-30min(根据颜色深浅调整时间，避免过度显色)

　　终止读数?：每孔加入50μL终止液终止反应，15min内用酶标仪在450nm波长下读取各孔OD值

　　六、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，校正OD值(标准品OD值减去空白孔OD值)为纵坐标，绘制四参数逻辑回归标准曲线

　　根据样本OD值从标准曲线中计算得到样本TLR3浓度，若样本浓度超出线性范围，需稀释后重新检测，结果乘以稀释倍数即可

　　七、性能参数

　　检测范围：15.6pg/mL ~ 1000pg/mL

　　灵敏度：低检测限<4pg/mL

　　重复性：批内变异系数CV<8%，批间变异系数CV<10%

　　特异性：与小鼠其他TLR家族成员无交叉反应

　　八、注意事项

　　试剂盒避免冻存，超过有效期禁止使用，不同批次试剂禁止混用

　　TMB底物避免接触氧化剂和强光，显色后及时读数，终止后避免长时间放置

　　实验过程中需佩戴手套、口罩，不同试剂更换枪头，避免交叉污染

　　终止液为酸性溶液，操作时注意防护，若接触皮肤及时清水冲洗

　　注：以上科研资料仅供参考!