ELISA实验结果分析方法

　　以下是ELISA实验结果分析方法的系统总结，结合实验数据处理、标准曲线绘制及结果验证等关键步骤：

　　一、数据预处理要点

　　复孔计算与CV控制?

　　每个样本需设置2-3个复孔，计算OD值平均值，CV值(变异系数)需≤20%?。

　　若OD值超出平均值±20%，需检查操作或重新实验?。

　　背景值校正?

　　样本OD值需减去空白孔(仅含缓冲液)的OD值?。

　　二、标准曲线绘制方法

　　数据拟合模型选择?

　　线性回归?：适用于线性范围明显的数据，要求R2≥0.99?。

　　四参数逻辑曲线?：适合S型数据(如高浓度平台期)，R2≥0.95?。

　　操作步骤(以Origin为例)?

　　导入浓度-OD值数据，绘制散点图→选择非线性拟合→设置方程(如四参数逻辑函数)→调整坐标轴为对数刻度?。

　　三、样本浓度计算

　　公式反推?

　　将样本OD值代入标准曲线方程(如y=ax+b)，反算浓度×稀释倍数?。

　　若样本OD值超出标准曲线范围，需稀释后重测?。

　　结果验证?

　　加标回收率应在80–120%之间，稀释线性需符合预期比例?。

　　四、常见问题与解决方案

　　问题? ?可能原因? ?解决方案?

　　标准曲线R2低 浓度梯度设置不合理 调整浓度范围或改用多项式拟合?

　　样本OD值过高 样本浓度超出检测上限 重新稀释样本?

　　复孔CV值超20% 操作误差或试剂批次差异 重复实验或更换试剂?

　　注：以上资料仅供参考，不作为实验依据，具体产品资料请咨询技术老师或品牌供应商。

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