ELISA板包被原理

　　ELISA板包被是通过物理吸附或化学偶联将目标分子(抗原/抗体)固定在微孔板表面的关键步骤，其原理和操作要点如下：

　　1. ?包被的基本原理?

　　物理吸附(被动包被)?

　　聚苯乙烯微孔板的疏水性表面在碱性缓冲液(如pH 9.6的碳酸盐缓冲液)中，通过疏水相互作用和静电吸附固定蛋白质?。适用于大多数大分子(如抗体、病毒蛋白)，但小分子(如肽段<10个氨基酸)因吸附能力弱需采用化学偶联?。

　　化学偶联(主动包被)?

　　使用交联剂(如EDC/NHS)将蛋白质的氨基或羧基与微孔板表面共价结合，适用于小分子抗原、多糖等不易吸附的分子?。

　　2. ?关键操作步骤?

　　缓冲液选择?：常用碳酸盐缓冲液(pH 9.6)优化蛋白质吸附?。

　　封闭处理?：包被后需用BSA或脱脂奶粉封闭未结合位点，减少非特异性结合?。

　　温度与时间?：4℃过夜包被可增强结合稳定性，37℃孵育适用于快速实验?。

　　3. ?注意事项?

　　小分子包被?：需通过载体蛋白(如KLH)偶联或化学交联提高吸附效率?。

　　洗涤控制?：包被后需洗涤去除未结合分子，避免干扰后续反应?。

　　通过合理选择包被方法及优化条件，可确保ELISA检测的灵敏度和特异性?。

　　注：本试剂盒仅供科研使用，不用于临床诊断。具体操作请以实际试剂盒说明书为准。

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