小鼠单克隆抗体的制备过程

　　小鼠单克隆抗体制备的核心是通过?杂交瘤技术?将免疫小鼠的B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。以下是关键步骤与要点：

　　1. ?抗原免疫小鼠?

　　抗原选择?：需高纯度蛋白(>90%)或偶联载体的小分子抗原(如KLH偶联多肽)?。

　　佐剂乳化?：

　　初次免疫?：抗原与弗氏wanquan佐剂(FCA)乳化(油包水状态)?。

　　加强免疫?：后续使用弗氏不wanquan佐剂(FIA)或直接注射抗原?。

　　免疫方案?：

　　皮下多点注射(如腋下、腹股沟)，间隔2-4周加强免疫3-5次?。

　　末次免疫后3-5天检测血清效价(ELISA效价≥1:10,000为合格)?。

　　2. ?细胞融合与杂交瘤筛选?

　　脾细胞制备?：处死免疫小鼠，无菌取脾，研磨成单细胞悬液?。

　　融合条件?：

　　脾细胞与骨髓瘤细胞(如SP2/0)按1:3比例混合，聚乙二醇(PEG)诱导融合?。

　　HAT培养基筛选?：

　　未融合的B细胞和骨髓瘤细胞因缺乏HGPRT酶而死亡，仅杂交瘤细胞存活?。

　　3. ?杂交瘤克隆化与抗体检测?

　　有限稀释法?：将杂交瘤细胞稀释至0.5-1个细胞/孔，培养后筛选单克隆?。

　　抗体检测?：

　　ELISA或Western Blot验证抗体特异性与效价?。

　　阳性克隆扩增后，通过腹水法或体外培养大量生产抗体?。

　　4. ?抗体纯化与保存?

　　粗提?：硫酸铵沉淀法浓缩腹水或培养上清?。

　　精细纯化?：Protein A/G亲和层析或抗原偶联柱纯化?。

　　保存条件?：

　　短期：4℃加0.02%NaN?(1-6个月)?。

　　长期：-20℃或-80℃分装冻存?。

　　关键注意事项

　　动物伦理?：遵循实验动物福利规范，减少免疫与采血痛苦?。

　　批次差异?：多克隆抗体易受动物个体差异影响，需严格质控(如SDS-PAGE纯度检测)?。

　　注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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