以下是本生对ELISA样本制备的关键步骤及注意事项，综合实验规范与常见问题：

　　一、样本类型处理要点?

　　血清制备?

　　采集后室温静置1小时(凝血)，4℃ 2500rpm离心10分钟取上清

　　避免溶血(血红素干扰HRP显色)和细菌污染(内源性酶致假阳性)

　　血浆处理?

　　使用EDTA抗凝管采集，30分钟内4℃离心分离

　　肝素抗凝剂可能干扰检测，需参照试剂盒要求选择

　　细胞培养上清?

　　1500rpm离心10分钟去除细胞碎片，分装后-80℃保存

　　尿液/脑脊液?

　　10000×g离心2分钟，去除沉淀物后检测

　　二、保存与冻存规范?

　　样本类型? ?短期保存? ?长期保存? ?禁忌?

　　血清/血浆 2-8℃ 48小时 -80℃(6个月) 反复冻融>3次

　　细胞上清 4℃ 24小时 -80℃(分装) 室温放置>30分钟

　　三、关键注意事项?

　　防污染措施?

　　使用无菌离心管，操作全程在冰上进行(除凝血步骤)

　　细菌污染样本需离心后取上清重新检测

　　离心参数控制?

　　血清/血浆：2500-3000rpm，10分钟

　　细胞裂解物：12000-13000rpm，5-10分钟

　　特殊样本处理?

　　高脂血样本需超速离心(10000×g 15分钟)

　　组织样本需液氮速冻后研磨，避免蛋白降解

　　四、常见问题解决方案?

　　假阳性高?：检查溶血/脂血情况，更换抗凝剂类型

　　重复性差?：确保分装冻存，避免冻融循环

　　浓度异常?：预实验确定样本稀释倍数(建议1:5-1:10)

　　通过规范操作可显著提升检测准确性。

　　注：以上资料仅供参考，如需具体品牌试剂盒的完整说明，可咨询技术老师或品牌供应商的详细文档。

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