冻存管样本保存操作指南

　　一、样本预处理

　　细胞样本?

　　消化后离心(1500rpm，5分钟)，弃上清，加入冻存液(如含5-10% DMSO的无血清冻存液)重悬，细胞浓度建议1×10^6/mL?

　　冻存体积不超过冻存管容量的75%(如2mL冻存管装1.5mL以内)，避免冻胀破裂?

　　菌种样本?

　　瓷珠法?：刮取菌苔与瓷珠混合，吸除多余液体后冻存?

　　甘油法?：菌液与50%甘油按1:1混合，终浓度25%甘油?

　　二、冻存操作流程

　　分装与标记?

　　使用耐低温标签或激光刻码标记管体，避免信息丢失?

　　拧紧管盖(双螺纹设计更佳)，防止液氮渗入?

　　降温程序?

　　梯度降温?：4℃→-20℃→-80℃→液氮气相层(-196℃)，避免冰晶损伤细胞?

　　程序降温盒?：可替代手动梯度，实现均匀降温?

　　三、存储注意事项

　　存储方式? ?风险控制?

　　液氮气相层 避免直接浸泡，防止管体爆裂?

　　-80℃冰箱 确保温度稳定，避免反复冻融?

　　四、复苏与安全规范

　　快速复温?：37℃水浴中轻柔摇晃至冰晶融化，避免高温长时间暴露?

　　防护措施?：

　　佩戴防冻手套、护目镜，防止液氮溅伤或管体炸裂?

　　复苏操作在生物安全柜内进行?

　　五、常见问题

　　渗漏风险?：检查胶圈密封性，避免使用老化冻存管?

　　冰塞现象?：均匀降温可减少压力积聚导致的管体破损?

　　注：以上资料仅供参考，不作为实验数据，具体请咨询品牌供应商或技术老师;

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